Kit PCR Direct Blood

Meudachadh luath air a ’ghine targaid gu dìreach a’ cleachdadh fuil mar theamplaid gun às-tharraing.

Bidh an t-inneal seo a ’gabhail ri polymerase DNA anti-inhibitor ginteil gus leudachadh a dhèanamh gu h-èifeachdach air ginean aon-leth-bhreac ann an genoma an duine. Tha an siostam bufair làn-leasaichte anns a ’phiseag seo a’ cuideachadh an polymerase gu làidir an aghaidh casg luchd-dìon PCR, agus mar sin faodaidh iad DNA àrdachadh gu dìreach le bhith a ’cleachdadh fuil agus ceallan cultair mar theamplaidean. Tha an toradh seo furasta obrachadh agus chan fheum e ceumannan iom-fhillte leithid glanadh DNA no pretreatment sampall.
Tha an cromag seo air a thoirt seachad mar 2 × MasterMix, agus faodar an ath-bhualadh a dhèanamh le bhith dìreach a ’cur ris an teamplaid fala agus na prìomhairean lorg co-fhreagarrach. Faodar a chur an sàs ann an ceallan cultair mamalan mar dhaoine, luchainn, mucan, crodh agus gnèithean eile, a bharrachd air fuil slàn ùr no 4 ℃ cryopreserved, anticoagulant (EDTA, citrate, heparin), clots fuil liquefied agus spotan fala tioram air an stòradh air cairtean malairteach Whatman 903 agus FTA Elute.

Cat. Chan eil Meud pacaidh
4992529 20 µl × 100 rxn
4992530 20 µl × 500 rxn

Mion-fhiosrachadh toraidh

Eisimpleir deuchainneach

Ceistean Cumanta

Tagaichean toraidh

Feartan

■ sìmplidh agus luath: faodar leudachadh PCR a dhèanamh gu dìreach le bhith a ’cleachdadh fuil mar theamplaid, gun fheum air ceumannan duilich ullachadh sampall agus toirt a-mach DNA.
■ Glainead àrd: Faodaidh sgiobadh ceumannan ro-làimhseachaidh sampaill agus toirt às DNA cuideachadh le bhith a ’seachnadh tar-thruailleadh sampaill.
■ Trchur àrd: Faodar an comharrachadh PCR airson samples mòra a dhèanamh le bhith a ’cothlamadh a’ phiseag le plaidean PCR 96/384-tobar.
■ Coitcheannas làidir: Faodaidh an t-inneal seo leudachadh gu h-èifeachdach air mìrean no criomagan GC àrd le structar àrd-sgoile iom-fhillte, agus faodaidh an fhaid leudachaidh a bhith suas ri 5 kb.
■ Dùbhlan làidir an aghaidh cuideam: Faodar an uidheamachd seo a chuir an sàs airson diofar ghnèithean agus sampallan fala air an gleidheadh ​​ann an diofar dhòighean.

Tagraidhean

Ann an toraidhean PCR a ’chidsin seo tha“ A ”aig a’ cheann 3 ’, a dh’ fhaodar a chleachdadh gu dìreach airson clonadh vector TA. Faodar an cromag seo a chleachdadh airson leudachadh air criomagan DNA genomic, mion-sgrùdadh ginteil àrd-throughput agus mion-sgrùdadh genotyping (leithid lorg gine).

Faodar na toraidhean gu lèir a ghnàthachadh airson ODM / OEM. Airson mion-fhiosrachadh,cliog air Seirbheis Customized (ODM / OEM)


  • Roimhe:
  • Air adhart:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example A ’cleachdadh anticoagulation EDTA daonna mar theamplaid, chaidh 4 gineachan le susbaint GC eadar-dhealaichte a mheudachadh le Blood Direct PCR Kit. Bha an siostam ath-bhualadh PCR 20 μl, agus chaidh fuil 1 μl a chleachdadh mar theamplaid.
    M: TIANGEN Comharra II; 1: Meud criomag 1090 bp, susbaint GC 68.1%; 2: Meud criomag 1915 bp, susbaint GC 70.4%; 3: Meud criomag 448 bp, susbaint GC 74.8%; 4: Meud criomag 1527 bp, susbaint GC 61.5%.
    Toraidhean deuchainneach: Faodaidh Kit PCR Blood Direct leudachadh gu h-èifeachdach air criomagan DNA le susbaint GC aig an raon 61.5% -74.8%, a ’moladh gu bheil e comasach dha criomagan àrd-GC a mheudachadh.
    Experimental Example A ’cleachdadh anticoagulation EDTA daonna mar theamplaid, chaidh 5 gine le faid eadar-dhealaichte (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 agus Hn4.0) a mheudachadh le Kit Direct Direct PCR. Bha an siostam ath-bhualadh PCR 20 μl, agus chaidh fuil 1 μl a chleachdadh mar theamplaid.
    M: TIANGEN Comharra II; 1-3: 3 diofar shampallan fala; NTC: smachd gun primers. Toraidhean deuchainneach: Faodaidh Kit PCR Blood Direct leudachadh a dhèanamh air criomagan leis an fhad cho fada ri 4 kb, a ’moladh gu bheil e comasach air criomagan fada a mheudachadh.
    Experimental Example A ’cleachdadh anticoagulation EDTA daonna mar theamplaid, chaidh Blood Direct PCR Kit a chleachdadh airson lorg PCR de dhiofar shamhlaichean fala. Bha an siostam ath-bhualadh PCR 20 μl, agus chaidh fuil 1 μl a chleachdadh mar theamplaid.
    M: TIANGEN Comharra II; 1-9: is e an ìre luchdachadh fala 0.1 μl, 0.2 μl, 0.3 μl, 0.4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl agus 5 μl, fa leth; NTC: smachd gun teamplaid
    Toraidhean deuchainneach: Tha neart làidir aig Blood Kit PCR Kit le fuil agus faodaidh iad sampallan fala a mheudachadh leis an raon luchdachadh de 0.1-5 μl.
    Experimental Example Chaidh sampallan fala bho ghnè daonna, radan, cearc agus gnèithean eile le leigheasan eadar-dhealaichte a chleachdadh mar theamplaidean. Chaidh Blood Direct PCR Kit a chleachdadh gus PRNP (daonna, 750 bp), Actin (rad, 200 bp), agus β-Actin (Cearc, 1.0 kb) a mheudachadh. Bha an siostam ath-bhualadh PCR 20 μl, agus chaidh fuil 1 μl a chleachdadh mar theamplaid. M: Comharra TIANGEN II.
    Toraidhean deuchainneach: Faodar Kit Direct Blood Direct a chuir an sàs air raon farsaing de shamhlaichean, agus faodar an lorg PCR dìreach a dhèanamh air sampallan fala bho ghrunn ghnèithean le diofar leigheasan.
    C: Gun bannan leudachaidh

    Teamplaid A-1

    ■ Anns an teamplaid tha neo-chunbhalachd pròtain no luchd-dìon Taq, msaa. ——Purify teamplaid DNA, cuir às do phròtainean pròtain no thoir air falbh teamplaid DNA le innealan glanaidh.

    ■ Chan eil dì-ghalarachadh an teamplaid coileanta —— Gu h-iomchaidh ag àrdachadh teòthachd dì-ghalarachadh agus a ’leudachadh ùine dì-ghalarachaidh.

    ■ Milleadh teamplaid —— Ath-ullaich an teamplaid.

    Primer A-2

    ■ Droch càileachd primers —— Dèan ath-synthesachadh an primer.

    . Seachain ioma-reothadh agus leaghadh no cryopreserved 4 ° C fad-ùine.

    ■ Dealbhadh neo-sheasmhach de phrìomhairean (me chan eil fad primer gu leòr, dimer air a chruthachadh eadar primers, msaa.) - Ath-dhealbhadh primers (seachain cruthachadh primer dimer agus structar àrd-sgoile)

    A-3 Mg2+dùmhlachd

    ■ Mg2+ dùmhlachd ro ìosal —— Meudaich Mg gu iomchaidh2+ dùmhlachd: Optimize an Mg2+ dùmhlachd le sreath de ath-bheachdan bho 1 mM gu 3 mM le eadar-ama de 0.5 mM gus an Mg as fheàrr a dhearbhadh2+ dùmhlachd airson gach teamplaid agus primer.

    A-4 Teòthachd Annealing

    ■ Bidh an teòthachd àrd annealing a ’toirt buaidh air ceangal primer agus teamplaid. —— Thoir air falbh an teòthachd blàthachaidh agus dèan an staid as fheàrr le caisead 2 ° C.

    Ùine leudachaidh A-5

    ■ Ùine leudachaidh goirid —— Meudaich an ùine leudachaidh.

    C: Meallta adhartach

    Phenomena: Bidh sampaill àicheil cuideachd a ’sealltainn na bannan òrdugh targaid.

    Truailleadh A-1 de PCR

    ■ Tar-thruailleadh sreath targaid no toraidhean leudachaidh —— Gu faiceallach gun a bhith a ’pìobadh an sampall anns a bheil sreath targaid anns an sampall àicheil no gan dòrtadh a-mach às an tiùb centrifuge. Bu chòir na h-ath-bheachdan no an uidheamachd a bhith fèin-ghluasadach gus cuir às do dh ’aigéid niuclasach a th’ ann, agus bu chòir truailleadh a bhith ann tro dheuchainnean smachd àicheil.

    ■ Truailleadh ath-bheachdan ——Cuir na h-ath-bheachdan agus stòr aig teòthachd ìosal.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ dùmhlachd ro ìosal —— Meudaich Mg gu iomchaidh2+ dùmhlachd: Optimize an Mg2+ dùmhlachd le sreath de ath-bheachdan bho 1 mM gu 3 mM le eadar-ama de 0.5 mM gus an Mg as fheàrr a dhearbhadh2+ dùmhlachd airson gach teamplaid agus primer.

    ■ Dealbhadh primer neo-iomchaidh, agus tha homology aig an t-sreath targaid leis an t-sreath neo-targaid. —— Ath-dhealbhadh primers.

    C: Meudachadh neo-shònraichte

    Phenomena: Tha na bannan leudachaidh PCR neo-chunbhalach leis a ’mheud ris a bheil dùil, an dara cuid mòr no beag, no uaireannan bidh an dà chuid bannan leudachaidh sònraichte agus bannan leudachaidh neo-shònraichte a’ tachairt.

    Primer A-1

    ■ Sònrachas primer bochd

    —— Ath-dhealbhadh primer.

    ■ Tha an dùmhlachd primer ro àrd —— Meudaich teothachd an dì-ghalarachadh agus cuir ris an ùine dì-ghalarachadh.

    A-2 Mg2+ dùmhlachd

    ■ Am Mg2+ tha an dùmhlachd ro àrd —— Lùghdaich gu ceart an dùmhlachd Mg2 +: Optimize an Mg2+ dùmhlachd le sreath de ath-bheachdan bho 1 mM gu 3 mM le eadar-ama de 0.5 mM gus an Mg as fheàrr a dhearbhadh2+ dùmhlachd airson gach teamplaid agus primer.

    A-3 Polymerase thermostable

    ■ Meud cus enzyme —— Thoir air falbh suim enzyme gu h-iomchaidh aig amannan 0.5 U.

    A-4 Teòthachd Annealing

    ■ Tha an teòthachd annealing ro ìosal —— Gu h-iomchaidh àrdaich an teòthachd blàthachaidh no gabh ris an dòigh annealing dà ìre

    Cearcaill A-5 PCR

    ■ Cus de chearcaill PCR —— Lùghdaich an àireamh de chearcaill PCR.

    C: Bannan glacaidh no smear

    Primer A-1—— Sònrachas sònraichte —— Ath-dhealbhaich an primer, atharraich suidheachadh agus fad a ’phrìomhaire gus a shònrachas a neartachadh; no a ’dèanamh PCR neadaichte.

    Teamplaid A-2 DNA

    —— Chan eil an teamplaid fìor-ghlan ——Purify an teamplaid no tarraing DNA le pasgain glanaidh.

    A-3 Mg2+ dùmhlachd

    ——Mg2+ dùmhlachd ro àrd —— Lùghdaich Mg gu ceart2+ dùmhlachd: Optimize an Mg2+ dùmhlachd le sreath de ath-bheachdan bho 1 mM gu 3 mM le eadar-ama de 0.5 mM gus an Mg as fheàrr a dhearbhadh2+ dùmhlachd airson gach teamplaid agus primer.

    A-4 dNTP

    ——Tha dùmhlachd dNTPs ro àrd —— Thoir air falbh dùmhlachd dNTP gu h-iomchaidh

    A-5 Teòthachd Annealing

    ——Tha teòthachd blàthachaidh ìosal —— Gu h-iomchaidh àrdaich an teòthachd blàthachaidh

    Cearcaill A-6

    ——To iomadh cearcall —— Dèan lùghdachadh air an àireamh rothaireachd

    C: Dè an ìre de DNA teamplaid a bu chòir a chur ris ann an siostam ath-bhualadh PCR 50 μl?
    ytry
    C: Ciamar a leasaicheas tu criomagan fada?

    Is e a ’chiad cheum am polymerase iomchaidh a thaghadh. Chan urrainnear Taq polymerase cunbhalach a dhearbhadh air sgàth dìth gnìomhachd ro-sgaoileadh 3’-5 ’, agus bidh mì-chothromachadh a’ lughdachadh èifeachdas leudachaidh criomagan gu mòr. Mar sin, chan urrainn dha Taq polymerase cunbhalach leudachadh a dhèanamh air mìrean targaid nas motha na 5 kb. Bu chòir Taq polymerase le atharrachadh sònraichte no polymerase fidelity àrd eile a thaghadh gus èifeachdas leudachaidh a leasachadh agus coinneachadh ri feumalachdan leudachadh criomag fada. A bharrachd air an sin, tha leudachadh air criomagan fada cuideachd ag iarraidh atharrachadh co-fhreagarrach air dealbhadh primer, ùine denaturation, ùine leudachaidh, pH bufair, msaa. Mar as trice, faodaidh primers le 18-24 bp toradh nas fheàrr a thoirt seachad. Gus casg a chuir air milleadh teamplaid, bu chòir an ùine dì-ghalarachaidh aig 94 ° C a lùghdachadh gu 30 diog no nas lugha gach cearcall, agus bu chòir an ùine airson teòthachd àrdachadh gu 94 ° C mus tèid an leudachadh a dhèanamh nas lugha na 1 min. A bharrachd air an sin, le bhith a ’suidheachadh teothachd an leudachaidh aig timcheall air 68 ° C agus a’ dealbhadh na h-ùine leudachaidh a rèir ìre 1 kb / min faodaidh sin dèanamh cinnteach gu bheil leudachadh èifeachdach air criomagan fada.

    C: Ciamar a leasaicheas tu fìorachd leudachaidh PCR?

    Faodar an ìre mearachd de leudachadh PCR a lùghdachadh le bhith a ’cleachdadh diofar polymerases DNA le fìor dhìlseachd. Am measg a h-uile polymeras DNA Taq a chaidh a lorg gu ruige seo, tha an ìre mearachd as ìsle agus an dìlseachd as àirde aig Pfu enzyme (faic an clàr ceangailte). A bharrachd air taghadh enzyman, faodaidh luchd-rannsachaidh ìre mùthaidh PCR a lughdachadh tuilleadh le bhith a ’dèanamh an fheum as fheàrr de shuidheachaidhean ath-bhualadh, a’ gabhail a-steach dèanamh suas bufair, dùmhlachd de polymerase thermostable agus a ’dèanamh an fheum as fheàrr de chearcall PCR.

    Sgrìobh do theachdaireachd an seo agus cuir thugainn e