Kit RNA Ceallan / Meur / Lusan TGuide

A-1 lysis cealla no homogenization gu leòr

---- Lùghdaich cleachdadh sampall, àrdaich an ìre de bufair lysis, àrdaich homogenization agus ùine lysis.

Tha suim sampall A-2 ro mhòr

---- Lùghdaich an ìre de shampall a chaidh a chleachdadh no àrdaich am bufair lysis.

A-1 lysis cealla no homogenization gu leòr

---- Lùghdaich cleachdadh sampall, àrdaich an ìre de bufair lysis, àrdaich homogenization agus ùine lysis.

Tha suim sampall A-2 ro mhòr

---- Feuch an toir thu sùil air a ’chomas giullachd as àirde.

Chan eil RNA A-3 air a lughdachadh gu tur bhon cholbh

---- An dèidh uisge gun RNase a chuir ris, fàg e airson beagan mhionaidean mus tèid a tharraing sa mheadhan.

A-4 Ethanol anns an eluent

---- An dèidh rinsing, centrifuge a-rithist agus thoir air falbh am bufair nighe cho mòr 'sa ghabhas.

Chan eil meadhan cultar cealla A-5 air a thoirt air falbh gu tur

---- Nuair a bhios tu a ’cruinneachadh cheallan, feuch an cuir thu às don mheadhan cultair cho mòr‘ s as urrainn dhut.

A-6 Chan eil na ceallan a tha air an stòradh ann an RNAstore air an centrifug gu h-èifeachdach

---- Tha dùmhlachd RNAstore nas motha na meadhan cultar cealla cuibheasach; mar sin bu chòir an fheachd ceud-ghluasadach a mheudachadh. Thathas a ’moladh centrifuge aig 3000x g.

A-7 susbaint RNA ìosal agus pailteas anns an sampall

---- Cleachd sampall adhartach gus faighinn a-mach a bheil an toradh ìosal air adhbhrachadh leis an sampall.

A-1 Chan eil an stuth ùr

---- Bu chòir nèapraigean ùra a stòradh ann an leaghan nitrogen sa bhad no sa bhad a chur ann an ath-ghiùlan RNAstore gus dèanamh cinnteach à buaidh às-tharraing.

Tha suim sampall A-2 ro mhòr

---- Lùghdaich sùim sampall.

A-3 RNase contamination

---- Ged nach eil RNase anns a ’bhufair a chaidh a thoirt seachad anns a’ phiseag, tha e furasta RNase a thruailleadh rè pròiseas às-tharraing agus bu chòir a làimhseachadh gu faiceallach.

Truailleadh electroforesis A-4

---- Cuir an àite am bufair electrophoresis agus dèan cinnteach gu bheil na stuthan consum agus an luchdachadh bufair saor bho thruailleadh RNase.

A-5 Cus luchdachadh airson electrophoresis

---- Lùghdaich an uiread de luchdachadh sampall, cha bu chòir luchdachadh gach tobar a bhith nas àirde na 2 μg.

Tha suim sampall A-1 ro mhòr

---- Lùghdaich sùim sampall.

A-2 Tha tòrr DNA ann an cuid de shamhlaichean agus faodar an làimhseachadh le DNase.

---- Dèan làimhseachadh DNase gun RNase chun fhuasgladh RNA a chaidh fhaighinn, agus faodar an RNA a chleachdadh gu dìreach airson deuchainnean às deidh làimhseachadh, no faodar a ghlanadh tuilleadh le innealan glanaidh RNA.

Airson glainneachan, bèicearachd aig 150 ° C airson 4 h. Airson soithichean plastaig, air am bogadh ann an NaOH 0.5 M airson 10 min, an uairsin air a roladh gu math le uisge gun RNase agus an uairsin sterilize gus RNase a thoirt air falbh gu tur. Feumaidh na h-ath-bheachdan no na fuasglaidhean a chaidh a chleachdadh san deuchainn, gu sònraichte uisge, a bhith saor bho RNase. Cleachd uisge gun RNase airson a h-uile ullachadh reagent (cuir uisge ri botal glainne glan, cuir DEPC gu dùmhlachd deireannach de 0.1% (V / V), crathadh tron ​​oidhche agus autoclave).