Measgachadh Meudaichidh TIANSeq HiFi

Meudachadh leabharlann premix PCR le toradh àrd leabharlainn, fidelity àrd agus claonadh bonn ìosal.

Tha TIANSeq HiFi Ampli ﬁ cation Mix na premix leudachaidh PCR àrd-dhìlseachd ùr, a tha freagarrach airson leudachadh PCR air leabharlann sreathan àrd-throughput agus clònadh agus lorg eile co-cheangailte ri PCR. Tha an Polymerase DNA Ultra HiFi anns an fhuasgladh ro-mheasgaichte na sheòrsa ùr de polymerase DNA luath agus àrd-dhìlseachd air a leasachadh le teicneòlas mean-fhàs moileciuil stiùirichte, a tha a ’neartachadh dàimh DNA polymerase ri teamplaidean. Tha an enzyme seo air astar leudachaidh agus comas leudachaidh a leasachadh, agus tha ìre soirbheachaidh PCR agus toradh thoraidhean air a mheudachadh. Tha gnìomhachd exonuclease sàr-mhath 3’- 5 ′ aig an enzyme (gnìomhachd dearbhaidh-dearbhaidh), agus faodaidh an dìlseachd ìre de thoraidhean prìomh-shruthach a ruighinn sa mhargaidh, le dearbhadh ann am pròiseas leudachadh gine agus leabharlann air a dhèanamh cinnteach. A bharrachd air an sin, tha gnìomh HotStart aig an DNA polymerase anns an toradh, a dh ’fhaodas smachd a chumail gu h-èifeachdach air leudachadh neo-shònraichte agus call gnìomhachd enzyme fo theodhachd ìosal, mar sin a’ dèanamh cinnteach à sònrachas agus seasmhachd leudachadh PCR. Tha siostam àrdachadh freagairt PCR cuideachd air fhilleadh a-steach don Mix, a tha chan e a-mhàin a ’leasachadh seasmhachd a’ mheasgachaidh, a ’neartachadh fulangas polymerase gu luchd-dìon ath-bhualadh PCR, ach cuideachd a’ leasachadh sùbailteachd Polymerase DNA Ultra HiFi gu teamplaidean le susbaint GC eadar-dhealaichte, mar sin gu bheil farsaingeachd farsaing de shampall agus raon cur-a-steach sampall aig an toradh, agus a ’lughdachadh roghainn bunait ath-bhualadh PCR.

Cat. Chan eil	Meud pacaidh
4992369	1 ml
4992370	5 × 1 ml
4992371	5 * 1ml
4992372	5 * 1ml

Cuir post-d thugainn

Mion-fhiosrachadh toraidh

Eisimpleir deuchainneach

Ceistean Cumanta

Tagaichean toraidh

Shìos an abhainn

Meudachadh PCR leabharlann NGS, meudachadh PCR sreath 1mh ginealach, clònadh fidelity àrd, lorg SNP, mutation sònraichte air làrach, msaa.

Feartan

■ Meudachadh àrd-èifeachdais: Dèan cinnteach gu bheil an ìre tionndaidh agus lughdaich na cuairtean leudachaidh.
■ Roghainn ìosal: Èifeachdas leudachaidh cothromaichte airson teamplaidean DNA le susbaint eadar-dhealaichte GC%.
■ Sònrachas àrd: Le seilbh HotStart agus sònrachas làidir.
■ Dìlseachd àrd: Tha an dìlseachd 50 uair cho àrd ri Taq DNA polymerase.
■ cugallachd àrd: Faodaidh cur-a-steach teamplaid a bhith cho ìosal ri 1 cg.

Faodar na toraidhean gu lèir a ghnàthachadh airson ODM / OEM. Airson mion-fhiosrachadh,cliog air Seirbheis Customized (ODM / OEM)

Roimhe: Adapter Clàr-amais TIANSeq (Illumina)

Air adhart: Modal Fragment / Càradh / Tail TIANSeq

	Figear 1. Chaidh beairteachadh leabharlann de DNA genomic le co-mheasan GC eadar-dhealaichte (cuir a-steach genomic 10 ng, leudachadh 8 cearcall) aig an aon àm le bhith a ’cleachdadh TIANSeq HiFi Amplification Mix agus HiFi enzyme bho Supplier K and N, agus chaidh toradh an leabharlainn a lorg le Agilent 2100. Sheall na toraidhean gu bheil toradh àrd leabharlainn aig TIANSeq HiFi Amplification Mix, le uile-choitcheannachd làidir airson susbaint GC eadar-dhealaichte, agus bha coileanadh beairteas an leabharlainn nas fheàrr na solaraichean eile.
	Sequencing dàtaCleachd TIANSeq HiFi Amplification Mix agus HiFi enzyme a chaidh a chleachdadh gu sònraichte airson leudachadh leabharlann NGS bho Supplier K agus N airson leudachadh leabharlann den aon DNA genomic (is e cuir a-steach genome 10 ng). An dèidh an òrdachadh, dèan sgrùdadh air ìre còmhdach agus dùblachadh an leabharlainn.
Roghainn GC	Figear 2. Meudaich leabharlannan genome le susbaint CG eadar-dhealaichte a ’cleachdadh TIANSeq HiFi Amplification Mix agus an HIFi bho Supplier K agus N. Tha an toradh a’ sealltainn gu bheil èideadh leabharlann leudachaidh Measgachadh Meudachaidh TIANSeq HiFi math agus às aonais roghainn GC, a tha co-ionann ris na toraidhean de chompanaidh K agus beagan nas fheàrr na toraidhean companaidh N. Tha na toraidhean a ’sealltainn gu bheil craoladh leabharlann leudachaidh TIANSeq HiFi Amplification Mix àrd, choilean an ìre dùblachadh na riatanasan, agus tha coileanadh leudachaidh an leabharlainn co-ionann ri coileanadh farpaisich.

C: Dè an sgaoileadh coitcheann a th ’ann de mheudan criomag ann an leabharlann GNA?

Aig an àm seo, tha teicneòlas sreathan àrd-throughput stèidhichte sa mhòr-chuid air teicneòlas sreathan an ath ghinealach. Leis gu bheil fad leughaidh teicneòlas sìtheachaidh an ath ghinealaich cuibhrichte, feumaidh sinn an sreath làn fhaid a bhriseadh sìos gu leabharlannan beaga criomag gus an òrdachadh. A rèir feumalachdan diofar dheuchainnean seicheachaidh, mar as trice bidh sinn a ’taghadh sreath aon-fhillte no sreathan le dà cheann. An-dràsta tha na criomagan DNA de leabharlann sreathan an ath ghinealach air an sgaoileadh anns an raon 200-800 bp.

C: Tha dùmhlachd DNA an leabharlann togte ìosal.

a) Tha càileachd DNA dona agus tha luchd-dìon ann. Cleachd sampallan DNA àrd-inbhe gus casg a chuir air gnìomhachd enzyme.

b) Chan eil an ìre de shampall DNA gu leòr nuair a thathar a ’cleachdadh dòigh gun PCR gus leabharlann DNA a thogail. Nuair a tha cuir a-steach an DNA sgapte nas àirde na 50 ng, faodar sruth-obrach gun PCR a dhèanamh gu roghnach rè pròiseas togail an leabharlainn. Ma tha an àireamh leth-bhreac den leabharlann ro ìosal airson a leantainn gu dìreach, faodar an leabharlann DNA a mheudachadh le PCR às deidh an ligation adapter.

c) Bidh truailleadh RNA a ’leantainn gu tomhas mearachdach tùsail DNA Faodaidh truailleadh RNA a bhith ann am pròiseas glanaidh DNA genomic, a dh’ fhaodadh leantainn gu tomhas DNA neo-mhearachdach agus gun luchdachadh DNA gu leòr aig àm togail leabharlann. Faodar RNA a thoirt air falbh le bhith a ’làimhseachadh le RNase.

C: Sheall an leabharlann DNA bannan annasach ann an sgrùdadh electrophoresis.

A-1

a) Nochdaidh criomagan beaga (60 bp-120 bp) mar as trice is e criomagan no criathragan atharrachaidh a tha air an cruthachadh le innealan-atharrachaidh. Faodaidh glanadh le grìogagan magnetach Agencourt AMPure XP na mìrean adapter seo a thoirt air falbh gu h-èifeachdach agus dèanamh cinnteach à càileachd sreathan.

b) Bidh criomagan mòra a ’nochdadh anns an leabharlann às deidh leudachadh PCR Meudaichidh meud criomag DNA an leabharlainn le 120 bp às deidh an adapter a leigeil a-steach. Ma tha an criomag DNA a ’dol suas nas motha na 120 bp às deidh ligation an adapter, dh’ fhaodadh seo a bhith air adhbhrachadh le leudachadh criomag neo-àbhaisteach de cus leudachadh PCR. Le bhith a ’lughdachadh na h-àireamh de chearcaill PCR faodaidh e casg a chuir air an t-suidheachadh.

c) Meud neo-àbhaisteach mìrean DNA leabharlainn às deidh ligation adapter Is e fad an inneal-atharrachaidh sa chidsin seo 60 bp. Nuair a tha dà cheann na criomag ceangailte ris na h-innealan-atharrachaidh, cha mheudaich an fhaid ach 120 bp. Nuair a bhios tu a ’cleachdadh inneal-atharrachaidh a bharrachd air an fhear a bheir an t-inneal seo seachad, cuir fios chun t-solaraiche gus fiosrachadh buntainneach a thoirt seachad leithid fad an atharrachaidh. Dèan cinnteach gun lean sruth-obrach agus obrachadh an deuchainn na ceumannan a tha air am mìneachadh san leabhar-làimhe.

d) Meud criomag DNA neo-àbhaisteach ron ligation adapter Is dòcha gu bheil an adhbhar airson an duilgheadas seo air adhbhrachadh le suidheachaidhean ath-bhualadh ceàrr rè briseadh DNA. Bu chòir diofar amannan freagairt a chleachdadh airson diofar chur-a-steach DNA. Ma tha an cur-a-steach DNA nas motha na 10 ng, tha sinn a ’moladh an ùine ath-bhualadh de 12 min a thaghadh mar an ùine tòiseachaidh airson optimization, agus tha meud a’ chriomag a chaidh a thoirt a-mach aig an àm seo sa mhòr-chuid anns an raon 300-500 bp. Faodaidh luchd-cleachdaidh fad mìrean DNA a mheudachadh no a lughdachadh airson 2-4 min a rèir na riatanasan aca fhèin gus na mìrean DNA a mheudachadh leis a ’mheud a tha a dhìth.

A-2

a) Chan eilear a ’dèanamh an ùine as fheàrr ma tha an DNA criomagach ro bheag no ro mhòr, thoir sùil air an Stiùireadh airson Taghadh Ùine Bloigh a tha air a thoirt seachad san stiùireadh gus an ùine ath-bhualadh a dhearbhadh, agus cleachd a’ phuing ùine seo mar smachd, a bharrachd air sin a stèidheachadh siostam ath-bhualadh gus 3 min a leudachadh no a ghiorrachadh gus atharrachadh nas ceart a dhèanamh air ùine briseadh.

A-3

Sgaoileadh meud neo-àbhaisteach de DNA às deidh làimhseachadh criomag

a) Modh leaghaidh ceàrr de dh ’ath-bhualadh criomag, no chan eil an ath-bheachdan air a mheasgachadh gu tur às deidh a leaghadh. Thaw an reagent 5 × Fragmentation Enzyme Mix air deigh. Nuair a tha e air leaghadh, measgaich an ath-fhreagairt gu cothromach le bhith a ’leaghadh gu socair aig bonn an tiùba. Na vortex an reagent!

b) Anns an t-sampall cuir a-steach DNA tha EDTA no truaillearan eile Tha ìsleachadh ianan salainn agus riochdairean chelating ann an ceum glanaidh DNA gu sònraichte cudromach airson soirbheachas na deuchainn. Ma thèid DNA a sgaoileadh ann an 1 × TE, cleachd am modh a tha air a thoirt seachad san stiùireadh gus criomag a dhèanamh. Ma tha dùmhlachd EDTA anns an fhuasgladh mì-chinnteach, thathas a ’moladh an DNA a ghlanadh agus a sgaoileadh ann an uisge deionized airson ath-bhualadh às deidh sin.

c) Tomhas tùsail DNA neo-mhearachdach Tha dlùth cheangal aig meud DNA mìnichte ris an ìre de chur-a-steach DNA. Mus tèid làimhseachadh criomag a dhèanamh, tha tomhas ceart de DNA a ’cleachdadh Qubit, Picogreen agus dòighean eile deatamach gus faighinn a-mach dè an ìre de DNA a th’ anns an t-siostam ath-bhualadh.

d) Chan eil ullachadh an t-siostam ath-bhualadh a ’leantainn an stiùiridh Feumar ullachadh siostam ath-bhualadh measgaichte a dhèanamh air deigh gu teann a rèir an stiùireadh. Gus dèanamh cinnteach à a ’bhuaidh as fheàrr, bu chòir a h-uile pàirt ath-bhualadh a chuir air deigh agus bu chòir an siostam ath-bhualadh ullachadh an dèidh fuarachadh iomlan. Às deidh an ullachadh a bhith air a chrìochnachadh, feuch am piocadh no pìob airson measgachadh gu math. Na bi vortex!

Q: Notaichean cudromach airson Kit Leabharlann DNA TIANSeq DirectFast (Illumina) (4992259/4992260)

1. Bidh dòigh measgachadh neo-iomchaidh (vortex, oscillation fòirneartach, msaa) ag adhbhrachadh cuairteachadh neo-àbhaisteach de mhìrean leabharlainn (mar a chithear san fhigear a leanas), agus mar sin a ’toirt buaidh air càileachd an leabharlainn. Mar sin, nuair a bhios tu ag ullachadh fuasgladh ath-bhualadh Fragmentation Mix, feuch an cuir thu pìobaireachd gu socair suas is sìos gus measgachadh, no cleachd an corragan gus a phriobadh agus a mheasgachadh gu cothromach. Bi faiceallach nach bi thu a ’measgachadh le vortex.

2. Feumar DNA àrd-ghlan a chleachdadh airson togail leabharlann

■ Ionracas math DNA: Tha an còmhlan electrophoresis nas motha na 30 kb, gun earball

■ OD260 / 230:> 1.5

■ OD260 / 280: 1.7-1.9

3. Feumaidh sùim cur-a-steach DNA a bhith neo-mhearachdach Thathas a ’moladh dòighean Qubit agus PicoGreen a chleachdadh gus tomhas a dhèanamh air DNA, seach Nanodrop.

4. Feumar susbaint EDTA ann am fuasgladh DNA a dhearbhadh Tha buaidh mhòr aig EDTA air an ath-bhualadh criomag. Ma tha susbaint EDTA àrd, feumar glanadh DNA a dhèanamh ron deuchainn às deidh sin.

5. Feumaidh am fuasgladh ath-bhualadh criomag ullachadh air deigh Tha am pròiseas briseadh mothachail air teòthachd agus ùine ath-bhualadh (gu sònraichte às deidh àrdachadh a chuir ris). Gus dèanamh cinnteach gu bheil an ùine freagairt ceart, ullaich siostam freagairt air deigh.

6. Feumaidh an ùine ath-bhualadh criomag a bhith neo-mhearachdach Bheir ùine ath-bhualadh a ’cheum criomag buaidh dhìreach air meud nan toraidhean criomag, agus mar sin a’ toirt buaidh air sgaoileadh meud criomagan DNA anns an leabharlann.

Q: Notaichean cudromach airson TIANSeq Fast RNA Library Kit (Illumina) (4992375/4992376)

1. Dè an seòrsa sampall a tha buntainneach don phasgan seo?

Faodaidh an seòrsa sampall buntainneach den chit seo a bhith làn RNA no mRNA purraichte le ionracas RNA math. Ma thèid RNA iomlan a chleachdadh gus an leabharlann a thogail, thathas a ’moladh an uidheamachd ìsleachaidh rRNA (Cat # 4992363/4992364/4992391) a chleachdadh gus rRNA a thoirt air falbh an toiseach.

2. An urrainnear sampaill FFPE a chleachdadh gus leabharlann a thogail leis an inneal seo?

Bidh an mRNA ann an sampaill FFPE air a lughdachadh gu ìre, le ionracas truagh. Nuair a bhios tu a ’cleachdadh a’ phiseag seo airson togail an leabharlainn, thathas a ’moladh an ùine briseadh a mheudachadh (an ùine criomag a ghiorrachadh no gun a bhith a’ coileanadh criomag).

3. A ’cleachdadh a’ cheum taghadh meud a tha air a thoirt seachad ann an leabhar-làimhe an toraidh, dè a dh ’fhaodadh a bhith ag adhbhrachadh gu bheil an gluasad a-steach a’ nochdadh gluasad beag?

Thèid taghadh meud a dhèanamh a rèir a ’cheum taghadh meud anns an leabhar-làimhe toraidh seo. Ma tha gluasaid ann, is dòcha gur e an adhbhar nach eil na grìogagan magnetach air an cothromachadh gu teòthachd an t-seòmair no nach eil iad làn mheasgaichte, chan eil am pìob-phìob cruinn no tha an leaghan air fhàgail anns a ’ghob. Thathas a ’moladh na molaidhean le adsorption ìosal a chleachdadh airson an deuchainn.

4. Taghadh innealan-atharrachaidh ann an togail leabharlannan

Chan eil reactar adapter anns an inneal togail leabharlann, agus thathas a ’moladh an uidheamachd seo a chleachdadh còmhla ri TIANSeq Single-Index Adapter (Illumina) (4992641/4992642/4992378).

5. QC den leabharlann

Dearbhadh cainneachdail leabharlainn: Tha Qubit agus qPCR air an cleachdadh gus dùmhlachd tomad agus dùmhlachd molar an leabharlainn a dhearbhadh. Tha an obrachadh gu tur a rèir leabhar-làimhe an toraidh. Mar as trice coinnichidh dùmhlachd an leabharlainn ri riatanasan sreath GNA. A ’lorg raon sgaoilidh leabharlann: A’ cleachdadh Agilent 2100 Bioanalyzer gus raon cuairteachaidh an leabharlainn a lorg.

6. Taghadh àireamh cearcall leudachaidh

A rèir an stiùireadh, is e an àireamh de chearcaill PCR 6-12, agus bu chòir an àireamh de chearcaill PCR a tha a dhìth a thaghadh a rèir an cur-a-steach sampall. Ann an leabharlannan le toradh àrd, bidh cus leudachaidh mar as trice a ’tachairt ann an diofar ìrean, a tha air a nochdadh le stùc beagan nas motha às deidh stùc an raon targaid ann a bhith a’ lorg Agilent 2100 Bioanalyzer, no tha an dùmhlachd lorg de Qubit nas ìsle na qPCR. Is e rud àbhaisteach a th ’ann an lughdachadh thairis air leudachadh, nach eil a’ toirt buaidh air sreath leabharlannan agus mion-sgrùdadh dàta às deidh sin.

7. Bidh spikes a ’nochdadh ann am pròifil lorg Agilent 2100 Bioanalyzer

Tha coltas spìcean ann an lorg Agilent 2100 Bioanalyzer mar thoradh air briseadh neo-chòmhnard de shamhlaichean, far am bi barrachd chriomagan ann am meud sònraichte, agus bidh seo nas fhollaisiche às deidh beairteachadh PCR. Anns a ’chùis seo, thathas a’ moladh gun a bhith a ’dèanamh an taghadh meud, ie cuir suidheachadh a’ chriomag gu 94 ° C airson guir 15 min, far a bheil cuairteachadh a ’chriomag beag agus dlùth, agus faodar an aon-ghnè a leasachadh.

Sgrìobh do theachdaireachd an seo agus cuir thugainn e