Kit PCR Ultra HiFidelity

Fidelity àrd, sònrachas àrd agus premix PCR tòiseachaidh àrd-èifeachdais.

Tha Ultra HiFidelity PCR Kit na premix leudachaidh PCR àrd-dhìlseachd ùr a tha freagarrach airson clonadh agus lorg co-cheangailte ri PCR. Tha an Polymerase DNA Ultra HiFi a tha sa chidsin na polymerase DNA luath agus àrd-dhìleas a chaidh a leasachadh le teicneòlas mean-fhàs moileciuil stiùirichte. Bidh e a ’neartachadh dàimh DNA polymerase ri teamplaidean, a’ leasachadh astar leudachaidh agus comas leudachaidh an enzyme, agus a ’meudachadh ìre soirbheachaidh PCR agus toradh toraidh.

Cat. Chan eil Meud pacaidh
4992970 1ml
4992971 5 * 1ml
4992978 5 * 5 * 1ml

 

 


Mion-fhiosrachadh toraidh

Eisimpleir deuchainneach

Ceistean Cumanta

Tagaichean toraidh

Feartan

■ Furasta obrachadh: Tha an cromag seo air a thoirt seachad mar 2 × premix, agus faodar PCR a dhèanamh le bhith dìreach a ’cur teamplaidean agus primers ris.
■ Dìlseachd àrd: Tha an dìlseachd 50 uair nas àirde na Taq polymerase.
■ Sònrachas àrd: Coileanadh tòiseachaidh teth sàr-mhath gus dèanamh cinnteach à sònrachas toraidh.
■ Meudachadh luath: Faodaidh astar an leudachaidh ruighinn 10-15 sec / kb.
■ Leudachadh làidir: Faodar suas ri 20 kb criomagan DNA a mheudachadh.
■ Iomchaidheachd farsaing: Tha PCR Enhancer anns a ’chidsin agus tha e freagarrach airson leudachadh air teamplaidean àrda GC agus iom-fhillte.

Sònrachadh

Seòrsa: Polymerase DNA fidelity àrd
Astar leudachaidh: 10-15 sec / kb
Meud criomag: <20kb
Tagraidhean: Meudachadh PCR fidelity àrd, clònadh gine, leudachadh teamplaid GC àrd, clonadh gine de genomes iom-fhillte, leudachadh cDNA fidelity àrd, lorg SNP, mutation sònraichte air làrach, msaa.
Toradh toirt a-mach DNA bho chaochladh stuthan plannta:
Nòta: Tha toradh DNA an urra ri seòrsachan sampaill. Tha na stuthan gu h-àrd bho dhuilleagan tairgse.

Faodar na toraidhean gu lèir a ghnàthachadh airson ODM / OEM. Airson mion-fhiosrachadh,cliog air Seirbheis Customized (ODM / OEM)


  • Roimhe:
  • Air adhart:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Tòisich teth gus dèanamh cinnteach à sònrachas toraidh
    Figear 1. Tha gnìomh tòiseachaidh teth aig Ultra HiFi gus dèanamh cinnteach à sònrachas toraidhean leudachaidh. Chaidh modh lòchrain molecular a chuir an sàs (Ma et al., Anal Biochem, 2006).
    Experimental Example Dìlseachd àrd sàr-mhath, 50 uair nas àirde na Taq Polymerase
    Figear 2. Tha dìlseachd Ultra HiFi 50 uair nas àirde na tha Taq polymerase cumanta. Tha an dìlseachd polymerization de Taq polymerase (às aonais gnìomhachd ceartachaidh) air a chleachdadh mar iomradh.
    Experimental Example Faodar leudachadh luath agus criomagan fada a mheudachadh gu luath
    Fig. 3. Faodaidh Ultra HiFi suas ri 5 sec / kb a leudachadh airson criomagan nas lugha na 4 kb. Airson criomagan fada, faodar an ùine leudachaidh a leudachadh gu h-iomchaidh. Airson criomagan nas motha na 15 kb, faodaidh an astar astar a bhith suas ri 30 sec / kb. M: Comharra TIANGEN D15000
    Experimental Example Experimental Example Experimental Example Uile-choitcheannachd làidir agus sònrachas àrd, furasta GC àrd a leughadh agus criomagan fada bho dhiofar stòran
    Figear 4. Tha sònrachas àrd aig Ultra HiFi gus dèanamh cinnteach gu bheil ìre soirbheachaidh leudachaidh agus meud toraidh airson diofar sheòrsaichean teamplaidean.
    A. Toraidhean leudachaidh Ultra HiFi
    B. Toraidhean leudachaidh enzyme Hi-Fi aig Solaraiche K.
    C. Toraidhean leudachaidh enzyme Hi-Fi aig Solaraiche N.
    M: Comharra TIANGEN D15000
    Caol 1-5. Toraidhean leudachaidh teamplaidean le faid eadar-dhealaichte: 1. 750 bp; 2. 1 kb; 3.
    2 kb; 4. 4 kb; 5. 6 kb
    Caol 6. Toradh leudachaidh teamplaid àrd GC: 1915 bp (GC%: 70%);
    Caol 7-11. Toradh leudachaidh teamplaidean 2 kb bho dhiofar genome: 7. Rat; 8.
    Rice; 9. Cruithneachd; 10. Corn; 11. Bacteria;
    Caol 12-14. Toradh leudachaidh criomag 8 kb de dh'fhaid: 12. Rice; 13. Corn;
    C: Gun bannan leudachaidh

    Teamplaid A-1

    ■ Anns an teamplaid tha neo-chunbhalachd pròtain no luchd-dìon Taq, msaa. ——Purify teamplaid DNA, cuir às do phròtainean pròtain no thoir air falbh teamplaid DNA le innealan glanaidh.

    ■ Chan eil dì-ghalarachadh an teamplaid coileanta —— Gu h-iomchaidh ag àrdachadh teòthachd dì-ghalarachadh agus a ’leudachadh ùine dì-ghalarachaidh.

    ■ Milleadh teamplaid —— Ath-ullaich an teamplaid.

    Primer A-2

    ■ Droch càileachd primers —— Dèan ath-synthesachadh an primer.

    . Seachain ioma-reothadh agus leaghadh no cryopreserved 4 ° C fad-ùine.

    ■ Dealbhadh neo-sheasmhach de phrìomhairean (me chan eil fad primer gu leòr, dimer air a chruthachadh eadar primers, msaa.) - Ath-dhealbhadh primers (seachain cruthachadh primer dimer agus structar àrd-sgoile)

    A-3 Mg2+dùmhlachd

    ■ Mg2+ dùmhlachd ro ìosal —— Meudaich Mg gu iomchaidh2+ dùmhlachd: Optimize an Mg2+ dùmhlachd le sreath de ath-bheachdan bho 1 mM gu 3 mM le eadar-ama de 0.5 mM gus an Mg as fheàrr a dhearbhadh2+ dùmhlachd airson gach teamplaid agus primer.

    A-4 Teòthachd Annealing

    ■ Bidh an teòthachd àrd annealing a ’toirt buaidh air ceangal primer agus teamplaid. —— Thoir air falbh an teòthachd blàthachaidh agus dèan an staid as fheàrr le caisead 2 ° C.

    Ùine leudachaidh A-5

    ■ Ùine leudachaidh goirid —— Meudaich an ùine leudachaidh.

    C: Meallta adhartach

    Phenomena: Bidh sampaill àicheil cuideachd a ’sealltainn na bannan òrdugh targaid.

    Truailleadh A-1 de PCR

    ■ Tar-thruailleadh sreath targaid no toraidhean leudachaidh —— Gu faiceallach gun a bhith a ’pìobadh an sampall anns a bheil sreath targaid anns an sampall àicheil no gan dòrtadh a-mach às an tiùb centrifuge. Bu chòir na h-ath-bheachdan no an uidheamachd a bhith fèin-ghluasadach gus cuir às do dh ’aigéid niuclasach a th’ ann, agus bu chòir truailleadh a bhith ann tro dheuchainnean smachd àicheil.

    ■ Truailleadh ath-bheachdan ——Cuir na h-ath-bheachdan agus stòr aig teòthachd ìosal.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ dùmhlachd ro ìosal —— Meudaich Mg gu iomchaidh2+ dùmhlachd: Optimize an Mg2+ dùmhlachd le sreath de ath-bheachdan bho 1 mM gu 3 mM le eadar-ama de 0.5 mM gus an Mg as fheàrr a dhearbhadh2+ dùmhlachd airson gach teamplaid agus primer.

    ■ Dealbhadh primer neo-iomchaidh, agus tha homology aig an t-sreath targaid leis an t-sreath neo-targaid. —— Ath-dhealbhadh primers.

    C: Meudachadh neo-shònraichte

    Phenomena: Tha na bannan leudachaidh PCR neo-chunbhalach leis a ’mheud ris a bheil dùil, an dara cuid mòr no beag, no uaireannan bidh an dà chuid bannan leudachaidh sònraichte agus bannan leudachaidh neo-shònraichte a’ tachairt.

    Primer A-1

    ■ Sònrachas primer bochd

    —— Ath-dhealbhadh primer.

    ■ Tha an dùmhlachd primer ro àrd —— Meudaich teothachd an dì-ghalarachadh agus cuir ris an ùine dì-ghalarachadh.

    A-2 Mg2+ dùmhlachd

    ■ Am Mg2+ tha an dùmhlachd ro àrd —— Lùghdaich gu ceart an dùmhlachd Mg2 +: Optimize an Mg2+ dùmhlachd le sreath de ath-bheachdan bho 1 mM gu 3 mM le eadar-ama de 0.5 mM gus an Mg as fheàrr a dhearbhadh2+ dùmhlachd airson gach teamplaid agus primer.

    A-3 Polymerase thermostable

    ■ Meud cus enzyme —— Thoir air falbh suim enzyme gu h-iomchaidh aig amannan 0.5 U.

    A-4 Teòthachd Annealing

    ■ Tha an teòthachd annealing ro ìosal —— Gu h-iomchaidh àrdaich an teòthachd blàthachaidh no gabh ris an dòigh annealing dà ìre

    Cearcaill A-5 PCR

    ■ Cus de chearcaill PCR —— Lùghdaich an àireamh de chearcaill PCR.

    C: Bannan glacaidh no smear

    Primer A-1—— Sònrachas sònraichte —— Ath-dhealbhaich an primer, atharraich suidheachadh agus fad a ’phrìomhaire gus a shònrachas a neartachadh; no a ’dèanamh PCR neadaichte.

    Teamplaid A-2 DNA

    —— Chan eil an teamplaid fìor-ghlan ——Purify an teamplaid no tarraing DNA le pasgain glanaidh.

    A-3 Mg2+ dùmhlachd

    ——Mg2+ dùmhlachd ro àrd —— Lùghdaich Mg gu ceart2+ dùmhlachd: Optimize an Mg2+ dùmhlachd le sreath de ath-bheachdan bho 1 mM gu 3 mM le eadar-ama de 0.5 mM gus an Mg as fheàrr a dhearbhadh2+ dùmhlachd airson gach teamplaid agus primer.

    A-4 dNTP

    ——Tha dùmhlachd dNTPs ro àrd —— Thoir air falbh dùmhlachd dNTP gu h-iomchaidh

    A-5 Teòthachd Annealing

    ——Tha teòthachd blàthachaidh ìosal —— Gu h-iomchaidh àrdaich an teòthachd blàthachaidh

    Cearcaill A-6

    ——To iomadh cearcall —— Dèan lùghdachadh air an àireamh rothaireachd

    C: Dè an ìre de DNA teamplaid a bu chòir a chur ris ann an siostam ath-bhualadh PCR 50 μl?
    ytry
    C: Ciamar a leasaicheas tu criomagan fada?

    Is e a ’chiad cheum am polymerase iomchaidh a thaghadh. Chan urrainnear Taq polymerase cunbhalach a dhearbhadh air sgàth dìth gnìomhachd ro-sgaoileadh 3’-5 ’, agus bidh mì-chothromachadh a’ lughdachadh èifeachdas leudachaidh criomagan gu mòr. Mar sin, chan urrainn dha Taq polymerase cunbhalach leudachadh a dhèanamh air mìrean targaid nas motha na 5 kb. Bu chòir Taq polymerase le atharrachadh sònraichte no polymerase fidelity àrd eile a thaghadh gus èifeachdas leudachaidh a leasachadh agus coinneachadh ri feumalachdan leudachadh criomag fada. A bharrachd air an sin, tha leudachadh air criomagan fada cuideachd ag iarraidh atharrachadh co-fhreagarrach air dealbhadh primer, ùine denaturation, ùine leudachaidh, pH bufair, msaa. Mar as trice, faodaidh primers le 18-24 bp toradh nas fheàrr a thoirt seachad. Gus casg a chuir air milleadh teamplaid, bu chòir an ùine dì-ghalarachaidh aig 94 ° C a lùghdachadh gu 30 diog no nas lugha gach cearcall, agus bu chòir an ùine airson teòthachd àrdachadh gu 94 ° C mus tèid an leudachadh a dhèanamh nas lugha na 1 min. A bharrachd air an sin, le bhith a ’suidheachadh teothachd an leudachaidh aig timcheall air 68 ° C agus a’ dealbhadh na h-ùine leudachaidh a rèir ìre 1 kb / min faodaidh sin dèanamh cinnteach gu bheil leudachadh èifeachdach air criomagan fada.

    C: Ciamar a leasaicheas tu fìorachd leudachaidh PCR?

    Faodar an ìre mearachd de leudachadh PCR a lùghdachadh le bhith a ’cleachdadh diofar polymerases DNA le fìor dhìlseachd. Am measg a h-uile polymeras DNA Taq a chaidh a lorg gu ruige seo, tha an ìre mearachd as ìsle agus an dìlseachd as àirde aig Pfu enzyme (faic an clàr ceangailte). A bharrachd air taghadh enzyman, faodaidh luchd-rannsachaidh ìre mùthaidh PCR a lughdachadh tuilleadh le bhith a ’dèanamh an fheum as fheàrr de shuidheachaidhean ath-bhualadh, a’ gabhail a-steach dèanamh suas bufair, dùmhlachd de polymerase thermostable agus a ’dèanamh an fheum as fheàrr de chearcall PCR.

    Sgrìobh do theachdaireachd an seo agus cuir thugainn e