■ Bidh bufairean as fheàrr airson stuth bheathaichean a ’dèanamh a’ phròiseas sìmplidh agus goireasach.
■ DNase air leth Bidh mi a ’lughdachadh truailleadh DNA genomic.
■ Tha an RNA àrd-ghlan agus deiseil airson a chleachdadh freagarrach airson tagraidhean cugallach sìos an abhainn.
■ Chan eil feum air às-tharraing phenol / cloroform, no LiCl agus sileadh ethanol, agus chan eil feum air centrifugation caisead CsCl, a tha a ’dèanamh a’ phròiseas sàbhailte agus earbsach.
■ RT-PCR.
■ Blot a Tuath, Dot Blot.
■ PCR fìor-ùine.
■ Mion-sgrùdadh chip.
■ Sgrionadh PolyA, eadar-theangachadh in vitro, mion-sgrùdadh dìon RNase agus clònadh moileciuil.
Faodar na toraidhean gu lèir a ghnàthachadh airson ODM / OEM. Airson mion-fhiosrachadh,cliog air Seirbheis Customized (ODM / OEM)
Stuth: 20 mg embryo (13 latha), dubhaig 15 mg, grùthan 10 mg, spleen 15 mg, 10 mg thymus, 20 mg sgamhain Dòigh: Chaidh RNA iomlan bho dhiofar shamhlaichean clò de radan a ghlanadh le bhith a ’cleachdadh Kit Measgachadh Fìor RNAprep. Toraidhean: Tha an dealbh electrophoresis gel agarose air a shealltainn gu h-àrd. Chaidh 2-4 μl de eluates 100 μl a luchdachadh gach sreath. M: TIANGEN DNA Comharra III; Caol 1-2: Embryo (13 latha); Caol 3: dubhaig; Caol 4-6: Grùthan; Caol 7: Spleen; Caol 8: Thymus; Caol 9: Sgamhan. Chaidh an electrophoresis a dhèanamh aig 6 V / cm airson 30 min air gel agarose 1%. |
A-1 lysis cealla no homogenization gu leòr
---- Lùghdaich cleachdadh sampall, àrdaich an ìre de bufair lysis, àrdaich homogenization agus ùine lysis.
Tha suim sampall A-2 ro mhòr
---- Lùghdaich an ìre de shampall a chaidh a chleachdadh no àrdaich am bufair lysis.
A-1 lysis cealla no homogenization gu leòr
---- Lùghdaich cleachdadh sampall, àrdaich an ìre de bufair lysis, àrdaich homogenization agus ùine lysis.
Tha suim sampall A-2 ro mhòr
---- Feuch an toir thu sùil air a ’chomas giullachd as àirde.
Chan eil RNA A-3 air a lughdachadh gu tur bhon cholbh
---- An dèidh uisge gun RNase a chuir ris, fàg e airson beagan mhionaidean mus tèid a tharraing sa mheadhan.
A-4 Ethanol anns an eluent
---- An dèidh rinsing, centrifuge a-rithist agus thoir air falbh am bufair nighe cho mòr 'sa ghabhas.
Chan eil meadhan cultar cealla A-5 air a thoirt air falbh gu tur
---- Nuair a bhios tu a ’cruinneachadh cheallan, feuch an cuir thu às don mheadhan cultair cho mòr‘ s as urrainn dhut.
A-6 Chan eil na ceallan a tha air an stòradh ann an RNAstore air an centrifug gu h-èifeachdach
---- Tha dùmhlachd RNAstore nas motha na meadhan cultar cealla cuibheasach; mar sin bu chòir an fheachd ceud-ghluasadach a mheudachadh. Thathas a ’moladh centrifuge aig 3000x g.
A-7 susbaint RNA ìosal agus pailteas anns an sampall
---- Cleachd sampall adhartach gus faighinn a-mach a bheil an toradh ìosal air adhbhrachadh leis an sampall.
A-1 Chan eil an stuth ùr
---- Bu chòir nèapraigean ùra a stòradh ann an leaghan nitrogen sa bhad no sa bhad a chur ann an ath-ghiùlan RNAstore gus dèanamh cinnteach à buaidh às-tharraing.
Tha suim sampall A-2 ro mhòr
---- Lùghdaich sùim sampall.
A-3 RNase contamination
---- Ged nach eil RNase anns a ’bhufair a chaidh a thoirt seachad anns a’ phiseag, tha e furasta RNase a thruailleadh rè pròiseas às-tharraing agus bu chòir a làimhseachadh gu faiceallach.
Truailleadh electroforesis A-4
---- Cuir an àite am bufair electrophoresis agus dèan cinnteach gu bheil na stuthan consum agus an luchdachadh bufair saor bho thruailleadh RNase.
A-5 Cus luchdachadh airson electrophoresis
---- Lùghdaich an uiread de luchdachadh sampall, cha bu chòir luchdachadh gach tobar a bhith nas àirde na 2 μg.
Tha suim sampall A-1 ro mhòr
---- Lùghdaich sùim sampall.
A-2 Tha tòrr DNA ann an cuid de shamhlaichean agus faodar an làimhseachadh le DNase.
---- Dèan làimhseachadh DNase gun RNase chun fhuasgladh RNA a chaidh fhaighinn, agus faodar an RNA a chleachdadh gu dìreach airson deuchainnean às deidh làimhseachadh, no faodar a ghlanadh tuilleadh le innealan glanaidh RNA.
Airson glainneachan, bèicearachd aig 150 ° C airson 4 h. Airson soithichean plastaig, air am bogadh ann an NaOH 0.5 M airson 10 min, an uairsin air a roladh gu math le uisge gun RNase agus an uairsin sterilize gus RNase a thoirt air falbh gu tur. Feumaidh na h-ath-bheachdan no na fuasglaidhean a chaidh a chleachdadh san deuchainn, gu sònraichte uisge, a bhith saor bho RNase. Cleachd uisge gun RNase airson a h-uile ullachadh reagent (cuir uisge ri botal glainne glan, cuir DEPC gu dùmhlachd deireannach de 0.1% (V / V), crathadh tron oidhche agus autoclave).
Bho chaidh a stèidheachadh, tha an fhactaraidh againn air a bhith a ’leasachadh toraidhean den chiad ìre le bhith a’ cumail ris a ’phrionnsapal
de chàileachd an toiseach. Tha na toraidhean againn air cliù air leth fhaighinn anns a ’ghnìomhachas agus luachmhor am measg luchd-ceannach ùr is sean.