■ Sùbailteachd àrd: Raon fiadhaich de mheud sampall tòiseachaidh, freagarrach airson toirt a-mach sampall mòr ann an aon ath-bhualadh.
■ Toradh àrd: Bidh dòigh sileadh a ’meudachadh toradh RNA ann an sampall.
■ Cleachdadh farsaing: Freagarrach airson mòran de dhiofar shamhlaichean leithid clò plannt is beathach, ceallan cultair, fuil, sruthadh bodhaig, msaa.
■ Obrachadh luath: Gheibhear DNA genomic taobh a-staigh 1 uair a thìde.
Seòrsa: Sileadh stèidhichte
Eisimpleir: Bhìoras, bacteria, fungas, beathach, stuth planntrais, ceallan cultair agus lionn cuirp.
Targaid: RNA
Ùine obrachaidh: ~ 1 uair
Tagraidhean: Bidh reagent Universal TRNzol a ’lughdachadh truailleadh neo-chunbhalachd leithid DNA agus pròtanan anns an RNA iomlan fìor-ghlan, agus faodar a chleachdadh gu dìreach airson diofar dheuchainnean bith-eòlas moileciuil mar Northern Blot, Dot Blot, sgrìonadh PolyA, eadar-theangachadh in vitro, mion-sgrùdadh dìon RNase, togail leabharlann cDNA , RT-PCR, PCR fìor-ùine agus sreath àrd-throughput.
Faodar na toraidhean gu lèir a ghnàthachadh airson ODM / OEM. Airson mion-fhiosrachadh,cliog air Seirbheis Customized (ODM / OEM)
Dòigh: Chaidh clò grùthan radan 30 mg, duilleagan rus 100 mg a chruinneachadh le bhith a ’bleith nitrogen leaghte; 1 × 106Chaidh ceallan cultair HepG2 agus meadhan cultair 700 μl Saccharomyces Cerevisiae (OD600 = 0.9) a chruinneachadh le centrifugation. Chaidh 1 ml de TRNzol Universal Reagent bho TIANGEN agus na toraidhean buntainneach bho sholaraiche L agus T a chur ris gach aliquot de shampall agus chaidh às-tharraing RNA a dhèanamh a rèir nam protocalan a thug gach solaraiche seachad. B ’e meud an elution 80 μl, 50 μl, 30 μl agus 30 μl airson na ceithir sampaill fa leth. Chaidh 3 μl den eluate a luchdachadh gach sreath.
MIII: TIANGEN Comharra III;
Chaidh an electrophoresis a dhèanamh aig 6 V / cm airson 30 min air agarose 1%.
Toraidhean: Faodaidh TIANGEN TRNzol Universal Reagent a bhith a ’toirt a-mach RNA fìor-ghlan agus ionracas math bho ghrùthan radan, duilleagan rus, ceallan cultair agus sampaill beirm, le àrd èifeachdas. Tha càileachd RNA an coimeas ri no beagan nas àirde na càileachd solaraiche L agus T.
A-1 lysis cealla no homogenization gu leòr
---- Lùghdaich cleachdadh sampall, àrdaich an ìre de bufair lysis, àrdaich homogenization agus ùine lysis.
Tha suim sampall A-2 ro mhòr
---- Lùghdaich an ìre de shampall a chaidh a chleachdadh no àrdaich am bufair lysis.
A-1 lysis cealla no homogenization gu leòr
---- Lùghdaich cleachdadh sampall, àrdaich an ìre de bufair lysis, àrdaich homogenization agus ùine lysis.
Tha suim sampall A-2 ro mhòr
---- Feuch an toir thu sùil air a ’chomas giullachd as àirde.
Chan eil RNA A-3 air a lughdachadh gu tur bhon cholbh
---- An dèidh uisge gun RNase a chuir ris, fàg e airson beagan mhionaidean mus tèid a tharraing sa mheadhan.
A-4 Ethanol anns an eluent
---- An dèidh rinsing, centrifuge a-rithist agus thoir air falbh am bufair nighe cho mòr 'sa ghabhas.
Chan eil meadhan cultar cealla A-5 air a thoirt air falbh gu tur
---- Nuair a bhios tu a ’cruinneachadh cheallan, feuch an cuir thu às don mheadhan cultair cho mòr‘ s as urrainn dhut.
A-6 Chan eil na ceallan a tha air an stòradh ann an RNAstore air an centrifug gu h-èifeachdach
---- Tha dùmhlachd RNAstore nas motha na meadhan cultar cealla cuibheasach; mar sin bu chòir an fheachd ceud-ghluasadach a mheudachadh. Thathas a ’moladh centrifuge aig 3000x g.
A-7 susbaint RNA ìosal agus pailteas anns an sampall
---- Cleachd sampall adhartach gus faighinn a-mach a bheil an toradh ìosal air adhbhrachadh leis an sampall.
A-1 Chan eil an stuth ùr
---- Bu chòir nèapraigean ùra a stòradh ann an leaghan nitrogen sa bhad no sa bhad a chur ann an ath-ghiùlan RNAstore gus dèanamh cinnteach à buaidh às-tharraing.
Tha suim sampall A-2 ro mhòr
---- Lùghdaich sùim sampall.
A-3 RNase contamination
---- Ged nach eil RNase anns a ’bhufair a chaidh a thoirt seachad anns a’ phiseag, tha e furasta RNase a thruailleadh rè pròiseas às-tharraing agus bu chòir a làimhseachadh gu faiceallach.
Truailleadh electroforesis A-4
---- Cuir an àite am bufair electrophoresis agus dèan cinnteach gu bheil na stuthan consum agus an luchdachadh bufair saor bho thruailleadh RNase.
A-5 Cus luchdachadh airson electrophoresis
---- Lùghdaich an uiread de luchdachadh sampall, cha bu chòir luchdachadh gach tobar a bhith nas àirde na 2 μg.
Tha suim sampall A-1 ro mhòr
---- Lùghdaich sùim sampall.
A-2 Tha tòrr DNA ann an cuid de shamhlaichean agus faodar an làimhseachadh le DNase.
---- Dèan làimhseachadh DNase gun RNase chun fhuasgladh RNA a chaidh fhaighinn, agus faodar an RNA a chleachdadh gu dìreach airson deuchainnean às deidh làimhseachadh, no faodar a ghlanadh tuilleadh le innealan glanaidh RNA.
Airson glainneachan, bèicearachd aig 150 ° C airson 4 h. Airson soithichean plastaig, air am bogadh ann an NaOH 0.5 M airson 10 min, an uairsin air a roladh gu math le uisge gun RNase agus an uairsin sterilize gus RNase a thoirt air falbh gu tur. Feumaidh na h-ath-bheachdan no na fuasglaidhean a chaidh a chleachdadh san deuchainn, gu sònraichte uisge, a bhith saor bho RNase. Cleachd uisge gun RNase airson a h-uile ullachadh reagent (cuir uisge ri botal glainne glan, cuir DEPC gu dùmhlachd deireannach de 0.1% (V / V), crathadh tron oidhche agus autoclave).
Bho chaidh a stèidheachadh, tha an fhactaraidh againn air a bhith a ’leasachadh toraidhean den chiad ìre le bhith a’ cumail ris a ’phrionnsapal
de chàileachd an toiseach. Tha na toraidhean againn air cliù air leth fhaighinn anns a ’ghnìomhachas agus luachmhor am measg luchd-ceannach ùr is sean.